定量pcr

考虑到cnblog不适合基因组领域这种类型的文章， 最终，我自己开通了公众号：碱基矿工，欢迎感兴趣的同学关注！ 也可以关注我的知乎：https://www.zhihu.com/people/yellowtree/activities 2018年1月修改：这篇文章写于2013年，首发在cnblog上，目前已经比较旧了。我重新在WGS系列中对其进行重写， 建议移步到这里 　　摘要： 从1977年第一代DNA测序技术（Sanger法） 1 ，发展至今三十多年时间，测序技术已取得了相当大的发展，从第一代到第三代乃至第四代，测序读长从长到短，再从短到长。虽然就当前形势看来第二代短读长测序技术在全球测序市场上仍然占有着绝对的优势位置，但第三和第四代测序技术也已在这一两年的时间中快速发展着。测序技术的每一次变革，也都对基因组研究，疾病医疗研究，药物研发，育种等领域产生巨大的推动作用。在这里我主要对当前的测序技术以及它们的测序原理做一个简单的小结。 图1：测序技术的发展历程 　　生命体遗传信息的快速获得对于生命科学的研究有着十分重要的意义。以上（图1）所描述的是自沃森和克里克在1953年建立DNA双螺旋结构以来，整个测序技术的发展历程。 第一代测序技术 　　第一代DNA测序技术用的是1975年由桑格（Sanger）和考尔森（Coulson）开创的链终止法或者是1976-1977年由马克西姆

生物的东西必须要主动去了解，否则视野容易受到限制，尤其是分子生物学的核心技术。 The Complete Guide to PCR (How it Works, Primer Design, and Running Reactions) 目的：从DNA双链中扩增出感兴趣的区段，用于后续的研究。 原理：DNA结构，双螺旋，AT、GC配对；DNA双链在临界温度会解链，退火后又会恢复；引物，DNA复制的起点，之所以需要引物是因为在DNA合成中DNA聚合酶只能把新的核苷酸加到已有的DNA链上。 操作核心： wiki上很全面 1. 引物设计，会考虑GC含量，决定退火温度； 2. 变性、退火和延伸； PCR Applications―Top Seven Categories Gene expression Genotyping (detection) Cloning Mutagenesis Methylation analysis Sequencing Medical, forensic, and applied sciences 问题： 1.真核生物的组蛋白会影响PCR吗？ 2.为什么需要前后引物，前后引物是如何p出指定区段的？ 逆转录PCR，就是PCR的一个常规应用，我也跑过，见过庞大的机器，也是先设计引物，然后提cDNA，定量。 一条RNA链被逆转录成为互补DNA